玉米赤霉烯酮免疫亲和柱的净化过程以及结果判定详细描述
点击次数：1392 更新时间：2020-12-16
玉米赤霉烯酮(Zearaleaone)又称F-2毒素，是玉米赤霉菌的代谢产物，具有类雌激素样作用，具有较强的生殖毒性和致畸作用，可引起动物发生雌激素亢进症，导致动物不孕或流产，对家禽、猪、牛和羊的影响较大，给畜牧业带来很大的经济损失。
玉米赤霉烯酮免疫亲和柱试验原理：
本产品的测定的基础是抗原抗体反应，玉米赤霉烯酮单克隆抗体连接在柱内凝胶上，样品中的玉米赤霉烯酮经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内，玉米赤霉烯酮与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到分析仪器中用于检测。
玉米赤霉烯酮免疫亲和柱净化过程：
1、3mL柱管取出上方堵头，减去上堵头螺纹下突出部分，插回柱子上(1mL柱管上方堵头取出后斜 剪断，然后再插回柱子上)，另一端与20mL针筒固定后使用；
2、准确移取上述混匀滤液，注入针筒中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过免疫亲和柱；
3、用20mL 水冲洗柱子，流速1秒/滴，弃去流出液，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余 液体；
4、准确加入2mL甲醇(色谱级)洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有 残余液体。收集全部洗脱液；
5、过有机滤膜(孔径0.22μm)后，进行HPLC测定；或用氮气吹干，经流动相复溶，过有机滤膜 (孔径0.22μm)后，参照GB 5009.209-2016或GB/T 28716-2012条件进行HPLC测定。
结果判定：
经玉米赤霉烯酮免疫亲和柱净化后，收集到的甲醇洗脱液可直接使用荧光计或者HPLC检测，也可使用薄层色谱或者酶联免疫试剂盒进行检测。收集到的1ml洗脱液中的玉米赤霉烯酮含量相当于1g样品中玉米赤霉烯酮含量。
过程中的注意事项：
1. 亲和柱使用前，需要提前平衡30min至室温；
2. 亲和柱与20mL针筒连接时，一定旋紧20mL针筒与堵头连接处，防止上样过程漏液；
3. 采用大量程移液器准确移取混匀滤液进行上样；样液流过柱体的速度不能过快，采用固相萃取架过柱 时可以调节流速为2秒/滴，若无此设备，自然重力流速也可；
4. 冲洗柱子时保持自然重力流速即可；对于酱油、醋、油类、玉米加工副产物及饲料等颜色较深的样品， 可以先用10mL 0.1%吐温20-PBS清洗，再用10 mL 10%甲醇-水冲洗，后用10mL水冲洗柱子；
5. 柱子冲洗过后一定要用洗耳球吹干柱子内残余的液体，但不能让柱子干燥时间过长，要立即加入洗脱 液；
6. 采用玻璃移液管准确移取2mL色谱级甲醇进行洗脱，自然重力流速即可(不可施压)，后一定要用 洗耳球吹干柱子内残余的甲醇，收集全部洗脱液；
7. 洗脱液必需先经过0.22μm滤膜过滤才能进行HPLC测定；
8. HPLC测定值接近高检出值时，样本实际含量可能大于柱容量而造成流穿，需减少上样体积。
适用范围及性能：
用于定量检测谷物、酒类等食品和饲料等样本中的玉米赤霉烯酮时的样品前处理。
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